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利用發(fā)酵,收集酵母菌體,用去離子水清洗三次,然后用含有不同金屬離子和凍干保護劑的磷酸鹽緩沖液重懸(50 mmol/L,pH 8.0),在經過預處理后,通過凍干機真空冷凍干燥可得到展示 RML 的畢赤酵母全細胞粉。
凍干機真空冷凍干燥前在菌懸液中添加一些保護劑,如山梨醇、蔗糖、果糖、海藻糖、葡萄糖、聚乙二醇、甘油等,能提高其活性和穩(wěn)定性。這些物質在凍干過程中其羥基可與蛋白質中的極性基團形成氫鍵,代替蛋白質極性基團周圍的水分子,使蛋白質表面形成一層假定的水化膜,保護氫鍵的連接位置不直接暴露在周圍環(huán)境中,穩(wěn)定蛋白質的結構,防止其因凍干而變性。
因此而知海藻糖、果糖和山梨醇等物質在凍干過程中能減少酶蛋白的變性,從而提高該酶的合成活力。與未處理的全細胞酶粉相比,凍干中加入這三種物質后,合成活力分別提高 17%、20.29%和 20.72%。
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